1.項(xiàng)目背景
糖類抗原15-3(CA15-3)是粘蛋白1（Mucin1或MUC1）經(jīng)水解后的一種可溶形式。
《乳腺癌診療指南（2022）》指出：CA15-3、癌胚抗原是乳腺癌中應(yīng)用價(jià)值較高的腫瘤標(biāo)志物，主要用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的病程監(jiān)測(cè)。CA15-3和癌胚抗原聯(lián)合應(yīng)用可顯著提高檢測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的敏感性。由于其對(duì)局部病變的敏感性低，且在某些良性疾病和其他器官的惡性腫瘤中也可升高，因此不適合用于乳腺癌的篩查和診斷。有研究表明，CA15-3項(xiàng)目可用于輔助II期和III期乳腺癌患者的監(jiān)控。對(duì)患者進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)得到的CA15-3檢測(cè)值應(yīng)與其他臨床方法聯(lián)合用于監(jiān)控乳腺癌。
2. 性能表現(xiàn)
針對(duì)糖類抗原15-3(CA15-3)的檢測(cè)，西寶生物推出4種單克隆抗體及1種抗原。具體性能如下（以下評(píng)估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗(yàn)證，建議客戶根據(jù)自身工藝進(jìn)行更為詳細(xì)的驗(yàn)證）
2.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)
組合1（兩試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017I）包被羧基磁珠+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017J）標(biāo)記吖啶酯；
組合2（三試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）標(biāo)記生物素+糖類抗原CA15-3單克隆抗體抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）；
組合3（兩試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）包被羧基磁珠+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記吖啶酯；
線性范圍：1 U/mL-300 U/mL；最低檢出限：1 U/mL。
2.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)
組合4（三試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）標(biāo)記生物素+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記堿性磷酸酶+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）；
組合5（兩試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）包被羧基磁珠+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記堿性磷酸酶；
線性范圍：1 U/mL-300 U/mL；最低檢出限：1 U/mL。
2.3穩(wěn)定性評(píng)估
2.3.1 各組分工作液穩(wěn)定性
采用磁珠標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0532A）分別將鏈酶親和素磁珠、生物素標(biāo)記CA15-3抗體濃縮液、磁珠包被CA15-3抗體濃縮液、吖啶酯標(biāo)記CA15-3抗體濃縮液配置成工作液及采用堿性磷酸酶標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0534A）將堿性磷酸酶標(biāo)記CA15-3抗體濃縮液配置成工作液，分別進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表1所示：
a.鏈酶親和素磁珠工作液?jiǎn)为?dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±10%以內(nèi)（不含S0），表明鏈酶親和素磁珠工作液熱穩(wěn)定性良好；
b.生物素標(biāo)記CA15-3抗體工作液?jiǎn)为?dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±10%以內(nèi)（不含S0），表明生物素標(biāo)記CA15-3抗體工作液熱穩(wěn)定性良好；
c.磁珠包被CA15-3抗體工作液?jiǎn)为?dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±10%以內(nèi)（不含S0），表明磁珠包被CA15-3抗體工作液熱穩(wěn)定性良好；
d.吖啶酯標(biāo)記CA15-3抗體工作液?jiǎn)为?dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±10%左右（不含S0），表明生物素標(biāo)記CA15-3抗體工作液熱穩(wěn)定性較好；
e.堿性磷酸酶標(biāo)記CA15-3抗體工作液?jiǎn)为?dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±20%以內(nèi)（不含S0），表明生物素標(biāo)記CA15-3抗體工作液熱穩(wěn)定性較好。
表1 各組分工作液熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)（37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異）
序號(hào) | CA15-3抗原 稀釋濃度U/mL | 鏈酶親和素磁珠工作液 | 生物素標(biāo)記CA15-3工作液 | 磁珠-包被CA15-3工作液 | 吖啶酯標(biāo)記CA15-3工作液 | 堿性磷酸酶標(biāo)記CA15-3工作液 |
S0 | 0 | 0.0% | -1.5% | 1.2% | -5.6% | -1.6% |
S1 | 3 | -4.7% | -1.5% | 0.4% | -9.6% | -17.1% |
S2 | 10 | -4.6% | -0.1% | -4.8% | -11.2% | -15.4% |
S3 | 30 | -4.5% | 0.7% | -3.2% | -11.2% | -16.7% |
S4 | 100 | -2.9% | 2.3% | -2.5% | -9.0% | -16.6% |
S5 | 300 | 0.4% | 5.6% | -2.7% | -9.5% | -17.4% |
平均變化（不含S0） | -3.3% | 1.4% | -2.5% | -10.1% | -16.6% | |
2.3.2 CA15-3抗原穩(wěn)定性
采用磁珠標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0532A）將CA15-3抗原（貨號(hào)：EKY0041C）稀釋成5個(gè)梯度（液體型），進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表2所示；
a）CA15-3抗原稀釋梯度（液體型）2-8℃熱加速7天與-20℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±5%以內(nèi);
b）CA15-3抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速7天與-20℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±5%以內(nèi);
c）CA15-3抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±5%以內(nèi);表明CA15-3抗原稀釋梯度（液體型）穩(wěn)定性良好。
表2 CA15-3抗原稀釋梯度（液體型）熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)
序號(hào) | CA15-3抗原稀釋濃度濃度U/mL | CA15-3 抗原稀釋梯度 （液體型） | CA15-3 抗原稀釋梯度 （液體型） | CA15-3 抗原稀釋梯度 （液體型） |
2-8℃熱加速7天與-20℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 | 37℃熱加速7天與-20℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 | 37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 | ||
S0 | 0 | 2.7% | -11.0% | -13.3% |
S1 | 3 | -3.1% | -3.4% | -0.3% |
S2 | 10 | 1.8% | 3.1% | 1.3% |
S3 | 30 | 0.7% | 0.4% | -0.3% |
S4 | 100 | -1.6% | -2.4% | -0.8% |
S5 | 300 | 0.9% | -1.0% | -1.9% |
平均變化（不含S0） | -0.2% | -0.7% | -0.4% | |
3臨床相關(guān)性
3.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)
西寶CA15-3抗體配對(duì)組合1（兩試劑模式）的測(cè)試臨床樣本與羅氏CA15-3試劑賦值的臨床樣本（相關(guān)性R2在0.93左右，相關(guān)性較好；
西寶CA15-3抗體配對(duì)組合2（三試劑模式）的測(cè)試臨床樣本與羅氏 CA15-3試劑賦值的臨床樣本（相關(guān)性R2在0.94左右，相關(guān)性較好；
西寶CA15-3抗體配對(duì)組合3（兩試劑模式）的測(cè)試臨床樣本與羅氏 CA15-3試劑賦值的臨床樣本（相關(guān)性R2在0.93左右，相關(guān)性較好；
3.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)
西寶CA15-3抗體配對(duì)組合4（三試劑模式）的測(cè)試臨床樣本與羅氏 CA15-3試劑賦值的臨床樣本相關(guān)性R2在0.94左右，相關(guān)性較好；
西寶CA15-3抗體配對(duì)組合5（兩試劑模式）的測(cè)試臨床樣本與羅氏 CA15-3試劑賦值的臨床樣本（相關(guān)性R2在0.91左右，相關(guān)性較好。
4.測(cè)試方案
特別注明：
1）若采用吖啶酯體系，建議CA15-3抗體與吖啶酯的標(biāo)記摩爾比在1:4左右；
2）若采用堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶體系，建議優(yōu)化酶與抗體標(biāo)記的摩爾比例。
4.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)
4.1.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)抗體配對(duì)組合1
待測(cè)樣本:預(yù)稀釋樣本加樣量20ul；采用合適的稀釋液將樣本稀釋10倍；
試劑1：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017I）-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017J）-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul預(yù)稀釋樣本（10倍稀釋）+50ul試劑1混合，37℃孵育9min，清洗；
第二步：加入50ul試劑2混合，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
4.1.2化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)抗體配對(duì)組合2
待測(cè)樣本:預(yù)稀釋樣本加樣量20ul；采用合適的稀釋液將樣本稀釋10倍；
M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑1：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）標(biāo)記-生物素稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul預(yù)稀釋樣本（10倍稀釋）+50ul M試劑+50ul 試劑1混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
4.1.3化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)抗體配對(duì)組合3
待測(cè)樣本:預(yù)稀釋樣本加樣量20ul；采用合適的稀釋液將樣本稀釋10倍；
試劑1：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul預(yù)稀釋樣本（10倍稀釋）+50ul試劑1混合，37℃孵育9min，清洗；
第二步：加入50ul試劑2混合，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S。
4.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)
4.2.1抗體配對(duì)組合4（三試劑模式）：
待測(cè)樣本:預(yù)稀釋樣本加樣量10ul；采用合適的稀釋液將樣本稀釋10倍；
M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑1：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）標(biāo)記-生物素稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：10ul預(yù)稀釋樣本（10倍稀釋）+50ul M試劑+50ul試劑1混合，37℃孵育10min；
第二步：加入50ul 試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第三步：加入底物，進(jìn)行測(cè)試。
4.2.2抗體配對(duì)組合5（兩試劑模式）：
待測(cè)樣本:預(yù)稀釋樣本加樣量10ul；采用合適的稀釋液將樣本稀釋10倍；
試劑1：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：10ul預(yù)稀釋樣本（10倍稀釋）+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入底物，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:迎凱Shine i2900。
5.產(chǎn)品信息(可提供大包裝試劑)
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 推薦配對(duì) |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體 | EKY0017I | 組合1（兩試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017I）包被羧基磁珠+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017J）標(biāo)記吖啶酯； 組合2（三試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）標(biāo)記生物素+糖類抗原CA15-3單克隆抗體抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）； 組合3（兩試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）包被羧基磁珠+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記吖啶酯； 組合4（三試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017PO）標(biāo)記生物素+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記堿性磷酸酶+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）； 組合5（兩試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）包被羧基磁珠+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記堿性磷酸酶； |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體 | EKY0017J | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體 | EKY0017P | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體 | EKY0017O | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017I）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1319A | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017J）-吖啶酯濃縮液 | DKY1319B | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1319C | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）-生物素濃縮液 | DKY1319D | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）-吖啶酯濃縮液 | DKY1319E | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P） -堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1319F | |
羧基磁性微球，1.2um | DEG0800D | |
鏈霉親和素磁性微球，1.5um | DEG0814A-10ml | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517B | |
重組堿性磷酸酶（高活性） | DCE0108L | |
磁珠標(biāo)記物稀釋液（化學(xué)發(fā)光） | DCD0532A | |
糖鏈抗原CA153抗原，校準(zhǔn)質(zhì)控 | EKY0041C | |
APS-5發(fā)光底物液（即用型） | ECD0532M-100ml | |
CA153堿性磷酸酶（ALP）標(biāo)記物稀釋液（化學(xué)發(fā)光） | DCD0534A |
1.項(xiàng)目背景
糖類抗原15-3(CA15-3)是粘蛋白1（Mucin1或MUC1）經(jīng)水解后的一種可溶形式。
《乳腺癌診療指南（2022）》指出：CA15-3、癌胚抗原是乳腺癌中應(yīng)用價(jià)值較高的腫瘤標(biāo)志物，主要用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的病程監(jiān)測(cè)。CA15-3和癌胚抗原聯(lián)合應(yīng)用可顯著提高檢測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的敏感性。由于其對(duì)局部病變的敏感性低，且在某些良性疾病和其他器官的惡性腫瘤中也可升高，因此不適合用于乳腺癌的篩查和診斷。有研究表明，CA15-3項(xiàng)目可用于輔助II期和III期乳腺癌患者的監(jiān)控。對(duì)患者進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)得到的CA15-3檢測(cè)值應(yīng)與其他臨床方法聯(lián)合用于監(jiān)控乳腺癌。
2. 性能表現(xiàn)
針對(duì)糖類抗原15-3(CA15-3)的檢測(cè)，西寶生物推出4種單克隆抗體及1種抗原。具體性能如下（以下評(píng)估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗(yàn)證，建議客戶根據(jù)自身工藝進(jìn)行更為詳細(xì)的驗(yàn)證）
2.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)
組合1（兩試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017I）包被羧基磁珠+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017J）標(biāo)記吖啶酯；
組合2（三試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）標(biāo)記生物素+糖類抗原CA15-3單克隆抗體抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）；
組合3（兩試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）包被羧基磁珠+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記吖啶酯；
線性范圍：1 U/mL-300 U/mL；最低檢出限：1 U/mL。
2.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)
組合4（三試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）標(biāo)記生物素+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記堿性磷酸酶+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）；
組合5（兩試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）包被羧基磁珠+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記堿性磷酸酶；
線性范圍：1 U/mL-300 U/mL；最低檢出限：1 U/mL。
2.3穩(wěn)定性評(píng)估
2.3.1 各組分工作液穩(wěn)定性
采用磁珠標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0532A）分別將鏈酶親和素磁珠、生物素標(biāo)記CA15-3抗體濃縮液、磁珠包被CA15-3抗體濃縮液、吖啶酯標(biāo)記CA15-3抗體濃縮液配置成工作液及采用堿性磷酸酶標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0534A）將堿性磷酸酶標(biāo)記CA15-3抗體濃縮液配置成工作液，分別進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表1所示：
a.鏈酶親和素磁珠工作液?jiǎn)为?dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±10%以內(nèi)（不含S0），表明鏈酶親和素磁珠工作液熱穩(wěn)定性良好；
b.生物素標(biāo)記CA15-3抗體工作液?jiǎn)为?dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±10%以內(nèi)（不含S0），表明生物素標(biāo)記CA15-3抗體工作液熱穩(wěn)定性良好；
c.磁珠包被CA15-3抗體工作液?jiǎn)为?dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±10%以內(nèi)（不含S0），表明磁珠包被CA15-3抗體工作液熱穩(wěn)定性良好；
d.吖啶酯標(biāo)記CA15-3抗體工作液?jiǎn)为?dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±10%左右（不含S0），表明生物素標(biāo)記CA15-3抗體工作液熱穩(wěn)定性較好；
e.堿性磷酸酶標(biāo)記CA15-3抗體工作液?jiǎn)为?dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±20%以內(nèi)（不含S0），表明生物素標(biāo)記CA15-3抗體工作液熱穩(wěn)定性較好。
表1 各組分工作液熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)（37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異）
序號(hào) | CA15-3抗原 稀釋濃度U/mL | 鏈酶親和素磁珠工作液 | 生物素標(biāo)記CA15-3工作液 | 磁珠-包被CA15-3工作液 | 吖啶酯標(biāo)記CA15-3工作液 | 堿性磷酸酶標(biāo)記CA15-3工作液 |
S0 | 0 | 0.0% | -1.5% | 1.2% | -5.6% | -1.6% |
S1 | 3 | -4.7% | -1.5% | 0.4% | -9.6% | -17.1% |
S2 | 10 | -4.6% | -0.1% | -4.8% | -11.2% | -15.4% |
S3 | 30 | -4.5% | 0.7% | -3.2% | -11.2% | -16.7% |
S4 | 100 | -2.9% | 2.3% | -2.5% | -9.0% | -16.6% |
S5 | 300 | 0.4% | 5.6% | -2.7% | -9.5% | -17.4% |
平均變化（不含S0） | -3.3% | 1.4% | -2.5% | -10.1% | -16.6% | |
2.3.2 CA15-3抗原穩(wěn)定性
采用磁珠標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0532A）將CA15-3抗原（貨號(hào)：EKY0041C）稀釋成5個(gè)梯度（液體型），進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表2所示；
a）CA15-3抗原稀釋梯度（液體型）2-8℃熱加速7天與-20℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±5%以內(nèi);
b）CA15-3抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速7天與-20℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±5%以內(nèi);
c）CA15-3抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±5%以內(nèi);表明CA15-3抗原稀釋梯度（液體型）穩(wěn)定性良好。
表2 CA15-3抗原稀釋梯度（液體型）熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)
序號(hào) | CA15-3抗原稀釋濃度濃度U/mL | CA15-3 抗原稀釋梯度 （液體型） | CA15-3 抗原稀釋梯度 （液體型） | CA15-3 抗原稀釋梯度 （液體型） |
2-8℃熱加速7天與-20℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 | 37℃熱加速7天與-20℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 | 37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 | ||
S0 | 0 | 2.7% | -11.0% | -13.3% |
S1 | 3 | -3.1% | -3.4% | -0.3% |
S2 | 10 | 1.8% | 3.1% | 1.3% |
S3 | 30 | 0.7% | 0.4% | -0.3% |
S4 | 100 | -1.6% | -2.4% | -0.8% |
S5 | 300 | 0.9% | -1.0% | -1.9% |
平均變化（不含S0） | -0.2% | -0.7% | -0.4% | |
3臨床相關(guān)性
3.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)
西寶CA15-3抗體配對(duì)組合1（兩試劑模式）的測(cè)試臨床樣本與羅氏CA15-3試劑賦值的臨床樣本（相關(guān)性R2在0.93左右，相關(guān)性較好；
西寶CA15-3抗體配對(duì)組合2（三試劑模式）的測(cè)試臨床樣本與羅氏 CA15-3試劑賦值的臨床樣本（相關(guān)性R2在0.94左右，相關(guān)性較好；
西寶CA15-3抗體配對(duì)組合3（兩試劑模式）的測(cè)試臨床樣本與羅氏 CA15-3試劑賦值的臨床樣本（相關(guān)性R2在0.93左右，相關(guān)性較好；
3.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)
西寶CA15-3抗體配對(duì)組合4（三試劑模式）的測(cè)試臨床樣本與羅氏 CA15-3試劑賦值的臨床樣本相關(guān)性R2在0.94左右，相關(guān)性較好；
西寶CA15-3抗體配對(duì)組合5（兩試劑模式）的測(cè)試臨床樣本與羅氏 CA15-3試劑賦值的臨床樣本（相關(guān)性R2在0.91左右，相關(guān)性較好。
4.測(cè)試方案
特別注明：
1）若采用吖啶酯體系，建議CA15-3抗體與吖啶酯的標(biāo)記摩爾比在1:4左右；
2）若采用堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶體系，建議優(yōu)化酶與抗體標(biāo)記的摩爾比例。
4.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)
4.1.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)抗體配對(duì)組合1
待測(cè)樣本:預(yù)稀釋樣本加樣量20ul；采用合適的稀釋液將樣本稀釋10倍；
試劑1：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017I）-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017J）-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul預(yù)稀釋樣本（10倍稀釋）+50ul試劑1混合，37℃孵育9min，清洗；
第二步：加入50ul試劑2混合，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
4.1.2化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)抗體配對(duì)組合2
待測(cè)樣本:預(yù)稀釋樣本加樣量20ul；采用合適的稀釋液將樣本稀釋10倍；
M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑1：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）標(biāo)記-生物素稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul預(yù)稀釋樣本（10倍稀釋）+50ul M試劑+50ul 試劑1混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
4.1.3化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)抗體配對(duì)組合3
待測(cè)樣本:預(yù)稀釋樣本加樣量20ul；采用合適的稀釋液將樣本稀釋10倍；
試劑1：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul預(yù)稀釋樣本（10倍稀釋）+50ul試劑1混合，37℃孵育9min，清洗；
第二步：加入50ul試劑2混合，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S。
4.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)
4.2.1抗體配對(duì)組合4（三試劑模式）：
待測(cè)樣本:預(yù)稀釋樣本加樣量10ul；采用合適的稀釋液將樣本稀釋10倍；
M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑1：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）標(biāo)記-生物素稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：10ul預(yù)稀釋樣本（10倍稀釋）+50ul M試劑+50ul試劑1混合，37℃孵育10min；
第二步：加入50ul 試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第三步：加入底物，進(jìn)行測(cè)試。
4.2.2抗體配對(duì)組合5（兩試劑模式）：
待測(cè)樣本:預(yù)稀釋樣本加樣量10ul；采用合適的稀釋液將樣本稀釋10倍；
試劑1：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：10ul預(yù)稀釋樣本（10倍稀釋）+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入底物，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:迎凱Shine i2900。
5.產(chǎn)品信息(可提供大包裝試劑)
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 推薦配對(duì) |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體 | EKY0017I | 組合1（兩試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017I）包被羧基磁珠+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017J）標(biāo)記吖啶酯； 組合2（三試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）標(biāo)記生物素+糖類抗原CA15-3單克隆抗體抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）； 組合3（兩試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）包被羧基磁珠+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記吖啶酯； 組合4（三試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017PO）標(biāo)記生物素+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記堿性磷酸酶+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）； 組合5（兩試劑模式）：糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）包被羧基磁珠+糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）標(biāo)記堿性磷酸酶； |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體 | EKY0017J | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體 | EKY0017P | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體 | EKY0017O | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017I）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1319A | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017J）-吖啶酯濃縮液 | DKY1319B | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1319C | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017O）-生物素濃縮液 | DKY1319D | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P）-吖啶酯濃縮液 | DKY1319E | |
糖類抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017P） -堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1319F | |
羧基磁性微球，1.2um | DEG0800D | |
鏈霉親和素磁性微球，1.5um | DEG0814A-10ml | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517B | |
重組堿性磷酸酶（高活性） | DCE0108L | |
磁珠標(biāo)記物稀釋液（化學(xué)發(fā)光） | DCD0532A | |
糖鏈抗原CA153抗原，校準(zhǔn)質(zhì)控 | EKY0041C | |
APS-5發(fā)光底物液（即用型） | ECD0532M-100ml | |
CA153堿性磷酸酶（ALP）標(biāo)記物稀釋液（化學(xué)發(fā)光） | DCD0534A |
