蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、酶類、補(bǔ)體、脂多糖、細(xì)菌外毒素和核酸等均為可溶性抗原，它們有相當(dāng)部分來源于組織和細(xì)胞，成分復(fù)雜。制備這類免疫原時(shí)，首先須將組織和細(xì)胞破碎，然后再從組織和細(xì)胞勻漿中提取目的蛋白或其他抗原，提純的抗原需鑒定后才能用做免疫原。

用于制備免疫原的材料必須是新鮮或低溫保存的。材料獲得后立即去除包膜或結(jié)締組織，臟器應(yīng)進(jìn)行灌洗，去除血管內(nèi)殘留的血液，用含0.5g/L NaN3的生理鹽水洗去血跡及污物；在4℃水浴或冰浴中將洗凈的組織剪成0.3～0.5cm3小塊，加入適量生理鹽水，裝入搗碎機(jī)筒內(nèi)制成組織勻漿。組織勻漿經(jīng)3000r/min離心10min后，上清液作為提取可溶性抗原的材料。上清液在提取前還必須進(jìn)行離心去除細(xì)胞碎片及微小的組織。

提取細(xì)胞的可溶性抗原，需將細(xì)胞破碎。根據(jù)細(xì)胞類型不同，選擇破碎的方法也有一定的差異，現(xiàn)介紹幾種常用的細(xì)胞破碎方法。

溶菌酶、纖維素酶、、蝸牛酶等在一定的條件能消化細(xì)菌和組織細(xì)胞。如溶菌酶對革蘭陽性菌的細(xì)胞壁有溶菌作用。酶處理法適用于多種微生物細(xì)胞的溶解，該方法具有作用條件溫和、內(nèi)含物成分不易受到破壞、細(xì)胞壁損壞程度可以控制等特點(diǎn)。

細(xì)胞主要因突然冷凍，細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成及胞內(nèi)外溶劑濃度突然改變而破壞。其方法是將破碎的細(xì)胞置-15～-20℃冰箱內(nèi)全部凍結(jié)，然后從冰箱取出，讓其在30～37℃中緩慢融化。如此反復(fù)兩次，大部分組織細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的顆粒可被破。此法適用于組織細(xì)胞，對微生物的細(xì)胞作用較差。

這是利用超聲波的機(jī)械振動而使細(xì)胞破碎的一種方法。進(jìn)行超聲破碎時(shí)，需間歇進(jìn)行，避免長時(shí)間超聲產(chǎn)熱，導(dǎo)致抗原破壞。也可將超聲粉碎的細(xì)胞置于冰浴降溫。超聲破碎細(xì)胞，方法簡單，重復(fù)性較好，且節(jié)省時(shí)間。微生物和組織細(xì)胞的破碎，均可采用此方法。

在適當(dāng)?shù)臏囟取H及低離子強(qiáng)度的條件下，表面活性劑能與脂蛋白形成微泡，通過細(xì)胞膜的通透性改變使細(xì)胞溶解。常用的表面活性劑有十二烷基磺酸鈉（SDS陽離子型），新潔爾滅，Triton X-100等。此方法作用比較溫和。在提取核酸時(shí)，常用此法破碎細(xì)胞。

用超速離心或梯度密度離心分離和純化抗原時(shí)，除個別成分外，極難將某一抗原成分分離出來，故只用于少數(shù)大分子抗原的分離，如IgM、C1q，甲狀腺球蛋白等，以及一些比重較輕的抗原物質(zhì)如載脂蛋白A、B等。多數(shù)的中、小分子量蛋白質(zhì)采用此種方法很難純化。

常用的方法是鹽析沉淀法。由于各種蛋白質(zhì)在不同鹽濃度中的溶解度不同，不同飽和度的鹽溶液沉淀的蛋白質(zhì)不同，從而使之從其他蛋白分離出來。鹽析法簡單方便，可用于蛋白質(zhì)抗原的粗提，丙種球蛋白的提取，蛋白質(zhì)的濃縮等。鹽析法提純的抗原純度不高，只適用抗原的初步純化。

一種含有各種分子的樣品溶液緩慢地流經(jīng)凝膠層析柱時(shí)，大分子物質(zhì)不易進(jìn)入凝膠顆粒的微孔，只能分布于顆粒之間，因此在洗脫時(shí)向下移動的速度較快，先被洗脫。小分子物質(zhì)除了可在凝膠顆粒間隙中擴(kuò)散外，還可以進(jìn)入凝膠顆粒的微孔中，洗脫時(shí)向下移動的速度較慢，隨后被洗脫。因此，蛋白質(zhì)分子按分子大小被分離。

離子交換層析的原理是利用一些帶離子基團(tuán)的纖維素或凝膠，吸附交換帶相反電荷的蛋白質(zhì)抗原。當(dāng)梯度洗脫時(shí)，逐步增加流動相的離子強(qiáng)度，使加入的離子與蛋白質(zhì)競爭纖維素上的電荷位置，從而使吸附的蛋白與離子交換劑解離。

親和層析是利用生物大分子的生物特異性，即生物大分子間所具有專一親和力而設(shè)計(jì)的層析技術(shù)。當(dāng)樣品流經(jīng)層析柱時(shí)，待分離的IgG可與SPA發(fā)生特異性結(jié)合，其余成分不能與之結(jié)合。將層析柱充分洗脫后，改變洗脫液的離子強(qiáng)度或pH值，IgG與固相基質(zhì)上的SPA解離，收集洗脫液便可得到欲純化的IgG。親和層析法純化蛋白質(zhì)抗原的主要優(yōu)點(diǎn)是純度高，簡單快捷，但成本較貴。

核酸分子具有免疫原性，可用于免疫原制備抗體。提取核酸的主要步驟是先將細(xì)胞破碎使核酸從細(xì)胞中游離出來，再用酚和氯仿抽提以去除蛋白質(zhì)，然后用乙醇沉淀核酸。

脂多糖（LPS）是革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁的重要成分，有多種生物學(xué)效應(yīng)。通常采用苯酚法提取LPS。

為獲得好的免疫效果，抗原純化后應(yīng)進(jìn)行鑒定才能用于動物免疫，抗原的鑒定主要包括以下幾個方面：

蛋白含量的測定較準(zhǔn)確的方法是凱氏定氮法，但由于要求有精密設(shè)備，故不適合一般實(shí)驗(yàn)室。一般實(shí)驗(yàn)室均采用分光光度計(jì)測量法。該法首先測定280nm和260nm的吸光度（A），再用經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算蛋白含量。

蛋白含量（mg/ml）=A280×1.45-A260×0.74。另外蛋白含量也可采用福林酚法。

測定分子量一般采用SDS-PAGE電泳法。

常采用區(qū)帶電泳法鑒定。

常采用雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。

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