支原體（Mycoplasma）污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域最為棘手的難題之一。這類(lèi)直徑僅0.1-0.3μm的生物體，能輕松穿透常規(guī)濾膜，卻能在污染后長(zhǎng)期與細(xì)胞共存而不引起培養(yǎng)基渾濁，因而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)失真。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球細(xì)胞系支原體污染率高達(dá)15%-60%，而國(guó)內(nèi)傳代細(xì)胞的污染率甚至超過(guò)57%，其所帶來(lái)的危害主要有以下幾個(gè)方面：
支原體污染的危害
1、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)失真：支原體會(huì)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、改變膜抗原性，甚至導(dǎo)致染色體畸變，使藥物篩選、基因編輯等研究結(jié)果不可靠。
2、資源浪費(fèi)：污染發(fā)生后，需耗費(fèi)數(shù)周重新培養(yǎng)細(xì)胞，延誤科研進(jìn)度。單是一支被污染的干細(xì)胞系可能直接導(dǎo)致數(shù)十萬(wàn)元損失。
3、生物安全風(fēng)險(xiǎn)：人源性支原體（如口腔支原體）可能通過(guò)氣溶膠傳播，威脅實(shí)驗(yàn)人員健康。
圖：細(xì)胞和基因治療產(chǎn)品支原體分析的藥典檢測(cè)要求【1】
污染路徑
污染來(lái)源 | 典型案例 | 防控措施 |
血清來(lái)源 | 牛血清攜帶豬鼻支原體 | 使用無(wú)支原體的胎牛血清，避免反復(fù)凍融 |
操作不當(dāng) | 實(shí)驗(yàn)人員口腔飛沫傳播 | 佩戴口罩，規(guī)范洗手流程 |
交叉污染 | 共用胰酶消化不同細(xì)胞系 | 實(shí)行"一 細(xì)胞一工具"原則 |
環(huán)境殘留 | 培養(yǎng)箱冷凝水滋生支原體 | 定期用75%乙醇擦拭設(shè)備 |
圖： 不同稀釋濃度支原體對(duì)BHK21細(xì)胞培養(yǎng)的影響（A: 陰性對(duì)照; B ~ I: 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8）【2】
解決方法
針對(duì)支原體污染，西寶生物支原體清除試劑提供了一種高效解決方案。該試劑包含兩類(lèi)主要藥物：一種可抑制支原體蛋白質(zhì)合成，另一種可阻斷支原體DNA合成。通過(guò)連續(xù)7~14d處理，該試劑能夠徹底殺滅并清除支原體，其效果持久可靠，應(yīng)用過(guò)程如下：
1、試劑保存與稀釋
將支原體清除試劑分裝成小規(guī)格，置于4℃冰箱保存。如短期內(nèi)未使用，剩余試劑需存放于-20℃冷凍以保持效力。使用時(shí)，按照1:100的體積比例，將試劑加入到完全培養(yǎng)基中。
2、細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備
以T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶為例，接種50-100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，加入4-6mL含支原體清除試劑的全新完全培養(yǎng)基。
3、培養(yǎng)基更換與細(xì)胞傳代
每2-3天更換一次含支原體清除試劑的全新完全培養(yǎng)基。進(jìn)行細(xì)胞傳代時(shí)，需先離心，取適量細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并添加含支原體清除試劑的新鮮完全培養(yǎng)基。
4、支原體檢測(cè)與處理周期
經(jīng)過(guò)7-10天處理后，使用支原體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)支原體清除情況，如仍有殘留，可繼續(xù)處理1-2個(gè)周期后再檢測(cè)。為確保徹底清除支原體，建議在1個(gè)月后進(jìn)行復(fù)檢，以排除潛在的污染風(fēng)險(xiǎn)。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)室全方位測(cè)試驗(yàn)證，該清除試劑對(duì)包括293T、HeLa、CHO-K1、LX2、SP2/0、ST、Vero、HA-VSMC、Jurkat及Min-6等在內(nèi)的多種細(xì)胞系均表現(xiàn)出顯著的支原體清除效果。同時(shí)，試劑對(duì)細(xì)胞的正常生理功能未產(chǎn)生明顯負(fù)面影響，未觀察到顯著毒副作用，確保細(xì)胞培養(yǎng)的安全性與穩(wěn)定性。
參考文獻(xiàn)：
【1】Totten AH, Adams AJ, Halas HK, Gebo JET, East AD, Lau AF. Comparison of Five Commercial Molecular Assays for Mycoplasma Testing of Cellular Therapy Products. J Clin Microbiol. 2023 Feb 22;61(2):e0149822. doi: 10.1128/jcm.01498-22.
【2】Netto C, Soccol VT, Sepulveda LM, Timenetsky J. Experimental infection of BHK21 and Vero cell lines with different Mycoplasma spp. Braz J Microbiol. 2015 Mar 4;45(4):1513-9. doi: 10.1590/s1517-83822014000400048.
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品貨號(hào) | 規(guī)格 |
支原體殺滅試劑（煙霧型） | AAB0011A | 100g |
Mycopla-water支原體去除劑（水槽用） | AAB0010A | 100ml(100×) |
支原體去除劑（細(xì)胞） | AAB0009A | 10mg/50mg |
支原體清除試劑(1000X) | DBM0108B | 1ml |
支原體預(yù)防試劑(1000X) | DBM0108A | 1ml/10×1ml |
支原體（Mycoplasma）污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域最為棘手的難題之一。這類(lèi)直徑僅0.1-0.3μm的生物體，能輕松穿透常規(guī)濾膜，卻能在污染后長(zhǎng)期與細(xì)胞共存而不引起培養(yǎng)基渾濁，因而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)失真。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球細(xì)胞系支原體污染率高達(dá)15%-60%，而國(guó)內(nèi)傳代細(xì)胞的污染率甚至超過(guò)57%，其所帶來(lái)的危害主要有以下幾個(gè)方面：
支原體污染的危害
1、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)失真：支原體會(huì)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、改變膜抗原性，甚至導(dǎo)致染色體畸變，使藥物篩選、基因編輯等研究結(jié)果不可靠。
2、資源浪費(fèi)：污染發(fā)生后，需耗費(fèi)數(shù)周重新培養(yǎng)細(xì)胞，延誤科研進(jìn)度。單是一支被污染的干細(xì)胞系可能直接導(dǎo)致數(shù)十萬(wàn)元損失。
3、生物安全風(fēng)險(xiǎn)：人源性支原體（如口腔支原體）可能通過(guò)氣溶膠傳播，威脅實(shí)驗(yàn)人員健康。
圖：細(xì)胞和基因治療產(chǎn)品支原體分析的藥典檢測(cè)要求【1】
污染路徑
污染來(lái)源 | 典型案例 | 防控措施 |
血清來(lái)源 | 牛血清攜帶豬鼻支原體 | 使用無(wú)支原體的胎牛血清，避免反復(fù)凍融 |
操作不當(dāng) | 實(shí)驗(yàn)人員口腔飛沫傳播 | 佩戴口罩，規(guī)范洗手流程 |
交叉污染 | 共用胰酶消化不同細(xì)胞系 | 實(shí)行"一 細(xì)胞一工具"原則 |
環(huán)境殘留 | 培養(yǎng)箱冷凝水滋生支原體 | 定期用75%乙醇擦拭設(shè)備 |
圖： 不同稀釋濃度支原體對(duì)BHK21細(xì)胞培養(yǎng)的影響（A: 陰性對(duì)照; B ~ I: 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8）【2】
解決方法
針對(duì)支原體污染，西寶生物支原體清除試劑提供了一種高效解決方案。該試劑包含兩類(lèi)主要藥物：一種可抑制支原體蛋白質(zhì)合成，另一種可阻斷支原體DNA合成。通過(guò)連續(xù)7~14d處理，該試劑能夠徹底殺滅并清除支原體，其效果持久可靠，應(yīng)用過(guò)程如下：
1、試劑保存與稀釋
將支原體清除試劑分裝成小規(guī)格，置于4℃冰箱保存。如短期內(nèi)未使用，剩余試劑需存放于-20℃冷凍以保持效力。使用時(shí)，按照1:100的體積比例，將試劑加入到完全培養(yǎng)基中。
2、細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備
以T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶為例，接種50-100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，加入4-6mL含支原體清除試劑的全新完全培養(yǎng)基。
3、培養(yǎng)基更換與細(xì)胞傳代
每2-3天更換一次含支原體清除試劑的全新完全培養(yǎng)基。進(jìn)行細(xì)胞傳代時(shí)，需先離心，取適量細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并添加含支原體清除試劑的新鮮完全培養(yǎng)基。
4、支原體檢測(cè)與處理周期
經(jīng)過(guò)7-10天處理后，使用支原體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)支原體清除情況，如仍有殘留，可繼續(xù)處理1-2個(gè)周期后再檢測(cè)。為確保徹底清除支原體，建議在1個(gè)月后進(jìn)行復(fù)檢，以排除潛在的污染風(fēng)險(xiǎn)。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)室全方位測(cè)試驗(yàn)證，該清除試劑對(duì)包括293T、HeLa、CHO-K1、LX2、SP2/0、ST、Vero、HA-VSMC、Jurkat及Min-6等在內(nèi)的多種細(xì)胞系均表現(xiàn)出顯著的支原體清除效果。同時(shí)，試劑對(duì)細(xì)胞的正常生理功能未產(chǎn)生明顯負(fù)面影響，未觀察到顯著毒副作用，確保細(xì)胞培養(yǎng)的安全性與穩(wěn)定性。
參考文獻(xiàn)：
【1】Totten AH, Adams AJ, Halas HK, Gebo JET, East AD, Lau AF. Comparison of Five Commercial Molecular Assays for Mycoplasma Testing of Cellular Therapy Products. J Clin Microbiol. 2023 Feb 22;61(2):e0149822. doi: 10.1128/jcm.01498-22.
【2】Netto C, Soccol VT, Sepulveda LM, Timenetsky J. Experimental infection of BHK21 and Vero cell lines with different Mycoplasma spp. Braz J Microbiol. 2015 Mar 4;45(4):1513-9. doi: 10.1590/s1517-83822014000400048.
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品貨號(hào) | 規(guī)格 |
支原體殺滅試劑（煙霧型） | AAB0011A | 100g |
Mycopla-water支原體去除劑（水槽用） | AAB0010A | 100ml(100×) |
支原體去除劑（細(xì)胞） | AAB0009A | 10mg/50mg |
支原體清除試劑(1000X) | DBM0108B | 1ml |
支原體預(yù)防試劑(1000X) | DBM0108A | 1ml/10×1ml |
